2.2液相條件的優(yōu)化

2種儀器優(yōu)化后的液相條件:柱溫為40℃，樣品室溫度為10℃，進(jìn)樣體積為5μL．流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液;流動(dòng)相B為甲醇．梯度洗脫程序設(shè)置為:(1) UPLC-QTOF:0～2.5 min,20%B;2.5～2.6 min,20%～100%B;2.6～3.6 min,100%B;3.6～3.7 min,100%～20%B;3.7～4.5 min,20%B．流速為0.5 m L/min.(2) UPLC-TQMS:0～2.5 min,10%B;2.5～2.6 min,10%～100%B;2.6～3.6 min,100%B;3.6～3.7 min,100%～10%B;3.7～4.5 min,10%B．流速為0.5 m L/min.

與乙腈相比，當(dāng)有機(jī)相為甲醇時(shí)，色譜峰的分離度更高，且由于甲醇在氫鍵作用下是較強(qiáng)的質(zhì)子供體，可提高目標(biāo)物的靈敏度．不同的酸度會(huì)對目標(biāo)物離子化效果、峰形和響應(yīng)強(qiáng)度造成影響．甲酸的加入不僅使其峰形更加對稱和尖銳，且利于FQs的離子化，得到較強(qiáng)的響應(yīng)．以環(huán)丙沙星為例，在不同流動(dòng)相條件下的色譜峰見圖1A.0.1%甲酸水溶液-甲醇流動(dòng)相為本實(shí)驗(yàn)最優(yōu)流動(dòng)相，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)．目標(biāo)化合物的響應(yīng)強(qiáng)度隨柱溫的升高而增強(qiáng)(圖1B)，考慮到柱溫對色譜柱壽命的影響，故選取40℃作為最佳柱溫．圖2為環(huán)丙沙星在UPLC-QTOF上的3種模式(MSE、Full scan、MRM)和UPLC-TQMS的MRM模式下定量離子的色譜圖．

2.3線性關(guān)系

2臺(tái)儀器各個(gè)采集模式下，目標(biāo)物的線性范圍、線性方程見表3和表4，各模式下目標(biāo)物線性方程的相關(guān)系數(shù)(R2)均大于0.99，表明其在相應(yīng)的范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系．崔敬鑫等[22]研究中FQs的線性范圍為5～100μg/L，本文方法的線性范圍與其方法的線性范圍相當(dāng)．

2.4檢出限、定量限及數(shù)據(jù)量比較

在UPLC-TQMS上，目標(biāo)物的檢出限和定量限分別為0.08～0.10μg/L和0.32～0.92μg/L，在UP-LC-QTOF上，檢出限和定量限為0.04～0.22μg/L和0.17～0.90μg/L,2臺(tái)儀器均顯示出較高的靈敏度．對比其他文獻(xiàn)報(bào)道的方法，本方法對目標(biāo)物的檢出限與定量限均低于或接近于其他方法的檢出限與定量限，且本方法的分析時(shí)間較短．

很明顯2臺(tái)儀器的MRM采集模式所需的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)空間更小(表3、4)，且UPLC-QTOF上MRM模式更具節(jié)省存儲(chǔ)空間的優(yōu)勢．對比之下，MS和MSE模式占據(jù)的存儲(chǔ)空間主要用于存儲(chǔ)更多的樣品質(zhì)譜信息．

2.5儀器的精密度

對3種不同質(zhì)量濃度的FQs混標(biāo)工作液重復(fù)測定6次，以考察儀器的精密度，測定濃度的重復(fù)性結(jié)果如表5所示．結(jié)果表明:用UPLC-TQMS測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.2%～3.3%之間．在UPLC-QTOF的MS/MSE/MRM模式下，測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.8%～3.8%、0.7%～11%和0.5%～6.7%，表明該檢測方法有良好的重現(xiàn)性．可以看出2臺(tái)儀器的精密度良好．

2.6環(huán)境樣品分析

將實(shí)際環(huán)境樣品于2臺(tái)儀器各模式下進(jìn)行檢測，均只有OFX被檢出，其他4種喹諾酮質(zhì)量濃度低于檢出限．定量數(shù)據(jù)均由Mass Lynx4.1軟件中的Target Lynx計(jì)算得到(表6).2臺(tái)儀器各模式下所測定的樣品1與樣品2的質(zhì)量濃度呈現(xiàn)一致的大小規(guī)律，且平行測試之間偏差較?。甎PLC-QTOF的MSE和UPLC-TQMS上測定的質(zhì)量濃度無顯著性差異，但是UPLC-QTOF的MRM模式和MS模式下檢出的質(zhì)量濃度高于UPLC-TQMS，可能是不同儀器和不同模式下的基質(zhì)效應(yīng)存在顯著差異．

3結(jié)論

本研究采用超高效液相色譜-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜，建立了5種FQs的定量檢測方法，各目標(biāo)物在3種檢測模式(MS/MSE/MRM)下的方法檢出限在0.04～0.22μg/L之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在0.5%～11%之間．通過與超高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法比較發(fā)現(xiàn)，超高效液相色譜-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜具有與超高效液相色譜-質(zhì)譜同樣出色的定量能力和儀器精密度．而高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜還可對目標(biāo)物準(zhǔn)確定性，從而有效降低質(zhì)譜MRM模式下假陽性的情況．因此，本文為氟喹諾酮類抗生素的快速、準(zhǔn)確定量分析提供了一種可靠的方法，具有較強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值．

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