在不可控出血中，創(chuàng)傷出血和外科手術(shù)失血是日常意外事故中經(jīng)常發(fā)生的事故，出血失控也是導(dǎo)致傷員死亡的重要因素。為了避免大量失血，因此開發(fā)出有效、快速并且安全的止血劑在事故現(xiàn)場以及院前及時有效的止血意義重大。近年來，隨著生物醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、生物工程的快速發(fā)展，生物止血材料在促進(jìn)傷口愈合方面顯示出巨大潛力。各種類型的止血粉也不斷被開發(fā)出來，其類型逐漸由動物源向植物源轉(zhuǎn)化，不可吸收向可吸收轉(zhuǎn)化。其中，微孔多聚糖止血粉是一種自主研發(fā)的新型高分子材料，主要是由馬鈴薯植物淀粉經(jīng)過變性處理后所制成的微孔多聚糖淀粉顆粒，可通過立即吸收血液中的液體成分以及濃縮血小板和凝血因子來實現(xiàn)，具有良好吸附凝血成分的效果，起到加速內(nèi)源性凝血過程，從而達(dá)到快速的術(shù)中止血目的。其作為一種來源于植物淀粉的材料，理論上來說是非常安全的，并且在人體傷口處施用后，最終會被組織以及體液中相應(yīng)的酶分解，形成單糖等機(jī)體正常所需成分，最終被機(jī)體所代謝出體外。生物相容性和高效止血材料的開發(fā)可以被視為術(shù)中和術(shù)后快速止血的最佳方法。2004年，Murat等首次描述了植物性淀粉來源的止血劑。目前，可吸收止血劑已經(jīng)成為外科醫(yī)療設(shè)備的重要組成部分，用于處理術(shù)中出血。鑒于這些止血劑能夠有效滿足外科手術(shù)過程的基本需求，新的止血劑不斷開發(fā)，其安全性也是最為關(guān)注的。

止血粉的商業(yè)信息表明，它們在外科手術(shù)中被用作控制毛細(xì)血管、靜脈和小動脈出血的輔助止血劑。成功的止血對于最大限度地減少與一般外科手術(shù)有關(guān)的圍手術(shù)期發(fā)病率和死亡率至關(guān)重要。在外科手術(shù)過程中，當(dāng)無法通過常規(guī)方法控制出血時，通常使用外科止血劑作為輔助手段，該方法可以實現(xiàn)快速止血的安全性和有效性，易于使用且能夠在大傷口中形成持久止血并且對血源性疾病沒有任何風(fēng)險。Giday等研究證實了止血粉末可以在動物動脈出血中的實現(xiàn)初始止血，而且沒有腸梗阻或意外的管腔效應(yīng)，沒有局部或局部顆粒效應(yīng)，沒有全身栓塞效應(yīng)，也沒有全身凝血作用。在臨床上，這種多聚糖止血粉在內(nèi)窺鏡鼻竇手術(shù)、皮膚外科手術(shù)和腹腔鏡手術(shù)中表現(xiàn)了出色的效果。目前國內(nèi)尚無同類具有自主知識產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)品面市。因此，本文重點探討微孔多聚糖止血粉的主要成分以及止血粉生物降解的動態(tài)變化規(guī)律，以期為臨床使用止血粉提供代謝依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

微孔多聚糖止血粉。

1.2 方法

1.2.1 供試品溶液的制備

止血粉樣品在烘箱中50℃烘至恒重后，稱量3份，每份稱取約5.0mg，分別溶于1mol/L三氟乙酸（TFA）溶液，配成濃度5mg/mL。100℃下降解12h，分別取200μL降解液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除酸解樣品中的TFA，用稀氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，加水定容于20mL容量瓶，配成上樣濃度50×10^-6，0.22µm濾膜過濾備用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

配制100×10^-6的葡萄糖和麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液及其混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；配制7個濃度梯度葡萄糖和麥芽糖二者的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，葡萄糖濃度分別為0.1×10^-6、0.5×10^-6、1×10^-6、2×10^-6、4×10^-6、8×10^-6和10×10^-6，麥芽糖濃度分別為1×10^-6、5×10^-6、10×10^-6、20×10^-6、40×10^-6、80×10^-6、100×10^-6；進(jìn)樣量為20μL；采集時間為40min。

1.2.3 止血粉標(biāo)準(zhǔn)曲線

將止血粉配成母液濃度為1mg/mL，沸水溶解，冷卻至室溫，再將母液倍比稀釋成0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL、0.0625mg/mL和0.03125mg/mL的溶液，分別取200μL加入至96孔板，然后再分別加入0.1mol/L碘溶液10μL，充分混勻后立即采用全波長酶標(biāo)儀在610nm處測其吸收度（A值），繪制淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 止血粉體外酶解

稱取定量止血粉于烘箱中50℃烘至恒重。配制20mmol/LNaH₂PO₄和6.7mmol/LNaCl溶液，用1mol/LNaOH/HCl調(diào)節(jié)pH為6.9，稱量止血粉110.8mg，用上述緩沖液配成止血粉濃度為1mg/mL。加入30.7mgCaCl₂（～2.5mmol/L），于沸水中溶解5min，冷卻至室溫。分別取出3份各3mL溶液，作為酶降解0h的樣品。剩余溶液中加入3mgα-淀粉酶粉末，混勻。把上述已加α-淀粉酶溶液分裝于三個相同的50mLEP管中（3個平行樣），每管33mL。放入37℃恒溫水浴鍋中進(jìn)行降解，分別作用1h、2h、3h、5h、8h、12h、24h、36h、48h后，每個時間點取3mL樣品，100℃煮沸除酶活性。其中1mL樣品于12000r/min離心15min，取上清液，超純水稀釋10倍至止血粉濃度為100×10-6用于離子色譜分析；其余2mL樣品滅酶活后不離心直接用于止血粉淀粉含量測定，每個樣品分別取3份200μL轉(zhuǎn)移至96孔板，然后分別加入0.1mol/L碘溶液10μL，充分混勻后立即采用全波長酶標(biāo)儀在610nm處測其吸收度（A值）。

2 結(jié)果

2.1 果糖和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品離子色譜圖的確定

如圖1所示，酸降解止血粉的標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合離子色譜分離條件下，果糖和葡萄糖的保留時間分別為14.9min和10.5min；葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=34.416x-8.551，線性相關(guān)系數(shù)為0.9997。

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