2 結(jié)果與分析

2.1 梔子根結(jié)線蟲病癥狀

調(diào)查發(fā)現(xiàn)賀州市梔子種植基地部分梔子出現(xiàn)植株矮小，葉片黃化失綠，生長(zhǎng)緩慢，嚴(yán)重的整株枯死等癥狀。受害植株根部形成大小不一的根結(jié)，根部表面壞死呈疏松孔狀（圖1）。取根組織在體視顯微鏡下觀察可見大小不一的卵囊，切開卵囊見橢圓形卵塊，根結(jié)組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)梨形的雌蟲。采用改良貝曼漏斗分離根際土壤可分離到大量根結(jié)線蟲二齡幼蟲。

2.2 形態(tài)學(xué)特征

雌蟲：蟲體乳白色，梨形；頸部突出，與體分界明顯；陰門和肛門位于末端；會(huì)陰部為指狀花紋；側(cè)尾腺口點(diǎn)狀，位于肛門兩側(cè)靠前位置；口針細(xì)長(zhǎng)，椎體部向背面略彎曲與桿部等長(zhǎng)；口針基部球較小，形成兩個(gè)球狀。中食道球卵圓形，瓣門近似圓形；排泄孔位于中食道球前口針基部稍后位置（圖2A）。會(huì)陰花紋近卵圓形或橢圓形；背弓較高，線紋較細(xì)且平滑，外側(cè)線紋呈波浪狀；具1～2條不太明顯側(cè)線；；腹面線紋纖細(xì)光滑，尾部較明顯（圖2B）。

二齡幼蟲：線形，身體體環(huán)清晰明顯，頭架骨化弱，唇區(qū)縊縮不明顯；排泄孔位于半月體后；口針細(xì)長(zhǎng)，基部較大且為圓球形；中食道球卵圓形；尾部透明區(qū)分界明顯，尾部縊縮明顯，尾尖鈍圓或細(xì)圓（圖3），其測(cè)量值見表1。

本研究中廣西賀州種群形態(tài)特征和測(cè)量值與象耳豆根結(jié)線蟲原始報(bào)道基本一致，故定為象耳豆根結(jié)線蟲。

2.3 分子特征

利用通用引物F194/PXB481和D2A/D3B分別對(duì)二齡幼蟲核糖體ITS區(qū)域及28SrDNAD2D3區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，得到約700bp的片段，PCR產(chǎn)物擴(kuò)增如圖（圖4）。經(jīng)雙向測(cè)序和拼接獲得ITS片段大小為757bp，GenBank登錄號(hào)為MH756121、MH756122，與國(guó)內(nèi)報(bào)道的福建、湖南、海南及越南象耳豆根結(jié)線蟲（M.enterolobii）群體的序列相似度是100%；與近似種南方根結(jié)線蟲（M.incognita）ITS（MH113856）的序列相似度為90%，與花生根結(jié)線蟲（M.arenaria）ITS序列（LC030356、LC030350）的序列相似度分別為88%和90%；與爪哇根結(jié)線蟲（M.javanica）ITS序列（AY438555、KX646187）的序列相似度均為88%。擴(kuò)增的28SrDNAD2D3區(qū)片段大小分別為764bp和716bp，GenBank登錄號(hào)為MN648519和MN648520，其中MN648520與國(guó)內(nèi)報(bào)道的廣東、福建，及美國(guó)、泰國(guó)象耳豆根結(jié)線蟲（M.enterolobii）群體的序列相似度為100%，MN648519與美國(guó)象耳豆根結(jié)線蟲（M.enterolobii）群體的序列相似度為100%，和中國(guó)福建、廣東及泰國(guó)象耳豆根結(jié)線蟲（M.enterolobii）群體的序列相似度為99%；MN648519與近似種花生根結(jié)線蟲（M.arenaria）和爪哇根結(jié)線蟲（M.javanica）D2D3區(qū)片段（AF435803、MT3412991）的序列相似度均為94%；MN648520與花生根結(jié)線蟲（M.arenaria）和爪哇根結(jié)線蟲（M.javanica）D2D3區(qū)片段（AF435803、MN096736）的序列相似度分別為95%和94%。該結(jié)果進(jìn)一步表明該病原線蟲為象耳豆根結(jié)線蟲（M.enterolobii）。

相關(guān)鏈接：土壤，蛋白酶K，乳酸

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