（2）底物濃度

底物濃度對酶解效果的影響如圖2，底物濃度越大酶解效率越低，達(dá)到高還原糖得率所需的時(shí)間就越長。在反應(yīng)進(jìn)行到60h的時(shí)候底物濃度為10g/L的得率為67.25%，底物濃度為70g/L的得率只有48.42%。在實(shí)際生產(chǎn)過程中，過高或過低的底物濃度都不適合用來工業(yè)生產(chǎn)，因此選擇30g/L、40g/L、50g/L進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)。

（3）pH

pH對還原糖得率的影響如圖3所示，從圖中可以看出，隨著pH的降低外切酶的酶解效果越來越好。在pH為3時(shí)反應(yīng)60h還原糖得率可以達(dá)到73.38%。所以選擇pH為3、4、5進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)。

（4）加酶量

加酶量對酶解效果的影響如圖4，加酶量越大達(dá)到反應(yīng)平衡的時(shí)間就越短酶解效果就越好。加酶量為20U/g時(shí)反應(yīng)60h的還原糖得率為42.18%，加酶量為100U/g，反應(yīng)36h就可達(dá)70.13%。盡管加酶量越大酶解效果就越好，但綜合經(jīng)濟(jì)因素，選擇40U/g，60U/g，80U/g進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)。

2、正交試驗(yàn)結(jié)果

使用Minitab進(jìn)行正交試驗(yàn)分析，按照一般線性模型進(jìn)行方差分析。極差分析結(jié)果表明，各因素的主次順序?yàn)椋篋（加酶量）＞C（底物濃度）＞B（pH）＞A（溫度）。表3的方差分析結(jié)果表明加酶量D，底物濃度C是顯著的影響因素與極差分析結(jié)果相符合。考慮到工業(yè)生產(chǎn)中的經(jīng)濟(jì)因素，pH越接近中性添加的緩沖劑就越少，原料成本就越低因此選擇pH=5；較低的溫度所需的能耗就越低，因此選擇溫度為450C。結(jié)合方差與極差結(jié)果分析菊粉外切酶酶解最佳的工藝條件為A₁B₃C₃D₃，即選擇450C的反應(yīng)溫度，pH為5，底物濃度50g/L，加酶量80U/g作為酶解的最佳反應(yīng)條件。

3、重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

按照正交試驗(yàn)的結(jié)論進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，在45⁰C，pH=5，加酶量為80U/g，底物濃度為50g/L的條件下反應(yīng)60h。進(jìn)行6組平行試驗(yàn)結(jié)果如表4，重復(fù)6組平行試驗(yàn)平均得率為83.63%。汪倫記等使用實(shí)驗(yàn)室自純化菊粉外切酶可以達(dá)到73.52%的酶解率（定義與本文中得率定義相同）。菊粉酶來源不同，菊粉原料產(chǎn)地不同可能是酶解率可能是酶解率差別的主要原因。

三、結(jié)論

本試驗(yàn)采用菊粉外切酶酶解菊粉生產(chǎn)高果糖漿，通過單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)，得出各因素影響還原糖得率的大小順序依次為：底物濃度＞加酶量＞pH＞溫度。最終確定最佳酶解條件為：底物濃度為50g/L，加酶量80U/g（底物），pH=5，溫度45⁰C，在此最優(yōu)條件下可以獲得83.63%的還原糖得率。重復(fù)性試驗(yàn)說明，該方案具有良好的重復(fù)性，可為工業(yè)生產(chǎn)高果糖漿提供理論依據(jù)與參考。

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