3結(jié)果與分析

3.1檢測波長的選擇

如圖1香蘭素和乙基香蘭素的吸收光譜所示,兩者最大吸收峰均為233、279、308 nm,但由于在233 nm處,很多有機化合物均會存在吸收,因此會出現(xiàn)大量吸收峰的干擾,因此,233 nm不作為兩者定量檢測優(yōu)選波長。

分別使用279 nm和308 nm作為檢測波長進行了100μg/mL香蘭素和乙基香蘭素的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液測定,如圖2所示,采用308 nm作為檢測波長時,相對于279 nm作為檢測波長,目標(biāo)峰峰形對稱性好,信噪比高。

使用無添加純牛奶作為空白樣本,添加2μg/mL混合樣本,分別使用279 nm和308 nm作為檢測波長進行檢測。檢測液相色譜圖如圖3所示,采用308 nm作為檢測波長時具有更好的峰形和更高的信噪比。

綜合香蘭素和乙基香蘭素的化學(xué)性質(zhì),以及對標(biāo)準(zhǔn)混合工作液和試劑樣本的檢測的表現(xiàn),采用308 nm作為檢測波長時,方法的檢測信號更強、干擾更低、信噪比更高,檢測性能更優(yōu)。因此后期檢測選擇308 nm作為檢測波長。

3.2前處理條件優(yōu)化

實驗證明在酸性條件下,香蘭素和乙基香蘭素以游離酸的形式存在,使用含有5%的乙酸的乙腈溶液作為前處理溶液,能夠極大程度的保證香蘭素和乙基香蘭素釋放于溶液中,而且酸性條件下能充分的將樣本中脂肪及蛋白固化,通過離心的方式即可將脂肪與蛋白除去,將上清液過濾后進樣,發(fā)現(xiàn)幾乎無雜質(zhì)影響檢測。

將離心后上清液使用正己烷進一步脫脂后進樣與簡化前處理操作后直接進樣比較,發(fā)現(xiàn)正己烷處理前后,待測物峰面積一致,說明簡化的前處理方式能夠完全去除樣本中脂肪的干擾,故實驗采取簡化前處理方式。

3.3方法的線性范圍及檢出限

將系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液進樣后,將峰面積Y(A)為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo),進行線性回歸如圖4所示。在0.1~100μg/mL濃度范圍內(nèi),香蘭素的線性回歸方程為Y=38.51X+1.15,r2=0.9999;香蘭素的線性回歸方程為Y=31.94X+0.75,r2=0.9999。表明2者的線性關(guān)系良好。

以3 S/N作為最低檢出限,測得香蘭素和乙基香蘭素的檢出限均為0.02μg/mL。

3.4回收率及精密度實驗

取空白樣本18份,每份2 mL,每6份為一組,在1、5、20µg/mL 3個水平下進行香蘭素和乙基香蘭素混合加標(biāo)回收實驗,測定結(jié)果見表1。如表1所示,香蘭素和乙基香蘭素的加標(biāo)回收率分別為97.0%~101.1%和96.0%~100.5%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%。說明建立的高效液相色譜法同時測定奶味飲料中的香蘭素和乙基香蘭素的方法回收率和精密度良好,具有可靠的檢測性能。

3.5實際樣品測定

應(yīng)用優(yōu)化好的方法進行了奶味飲料中香蘭素和乙基香蘭素的含量測定,色譜圖5所示。香蘭素及乙基香蘭素均呈現(xiàn)出良好的吸收峰,且無干擾及拖尾峰存在,說明建立的聯(lián)合檢測的方法性能良好。

對市售的10種奶味飲料成品以及10種外賣購買奶茶樣品進行了香蘭素和乙基香蘭素含量的測定,檢出情況如表2所示。檢測結(jié)果表明市面上奶味飲料中很多產(chǎn)品含有一定含量的奶味增加劑香蘭素和乙基香蘭素,對市場奶味飲料的質(zhì)量監(jiān)管具有一定的指導(dǎo)意義。

4結(jié)論

本研究建立了一種利用高效液相色譜法同時測定奶味飲料中的香蘭素和乙基香蘭素的檢測方法,結(jié)合香蘭素和乙基香蘭素的吸收光譜、空白樣本添加法檢測和實際樣本檢測結(jié)果,最優(yōu)的選擇308 nm作為檢測波長;優(yōu)化了樣本的前處理方式,簡化了實驗條件,通過含有5%乙酸的乙腈溶液進行樣本中香蘭素和乙基香蘭素的提取,有效的提取了目標(biāo)分析物,提高了檢測效率;香蘭素和乙基香蘭素在0.1~100μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)均大于0.999,以3S/N作為最低檢出限,方法的檢出限均為0.02μg/mL;方法的加標(biāo)回收率分別為97.0%~101.1%和96.0%~100.5%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%,說明建立的高效液相色譜法同時測定奶味飲料中的香蘭素和乙基香蘭素的方法回收率和精密度良好,具有可靠的檢測性能。

實驗表明,新建立的方法檢測效率極大提升、回收率及精密度高、可推廣性強,對市場奶味飲料中的奶味增加劑的監(jiān)管和檢測具有重要的意義。

聲明：本文所用圖片、文字來源《食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報》2020年9月，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請與本網(wǎng)聯(lián)系

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