煙曲霉震顫素主要是由煙曲霉產(chǎn)生的一類有毒代謝產(chǎn)物。1971年國(guó)外有人分離出了8株煙曲霉，并從其產(chǎn)毒培養(yǎng)物中分離出兩種對(duì)小鼠具有震顫毒性的代謝產(chǎn)物，經(jīng)純化鑒定后，命名為煙曲霉震顫素A及煙曲霉震顫素B(簡(jiǎn)稱FTA，F(xiàn)TB)。

通過質(zhì)譜、紅外光譜、核磁共振及X射線衍射等手段，山崎、COle和Eickman等先后確定了FTA、FTB和FTC等的化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間立體結(jié)構(gòu)(如圖11—5所示)。FTA的分子式為C₃₂H₄₁N₃0₇，F(xiàn)TB的分子式為C₂₇H₃₃N₃0₅。

一、污染來源與分布

煙曲霉廣泛分布在世界各地的土壤中，尤以稻田、菜地土樣中檢出率高，極有可能污染糧食、蔬菜、飼料、畜禽舍、墊草等。在40ºC以上繁殖力很強(qiáng)，對(duì)人畜的健康造成潛在威脅。煙曲霉系中有6個(gè)種，在大米、玉米、小麥和燕麥等食品中煙曲霉檢出較多，在煙曲霉系中可形成子囊孢子的有費(fèi)氏曲霉系。費(fèi)氏曲霉廣泛分布于土壤中，可引起水果腐爛。常常能在干燥的飼料中分離出費(fèi)氏曲霉。費(fèi)氏曲霉能產(chǎn)生震顫毒素，包括FTA、FTB、FTC、疣孢青霉原和TR-2等。費(fèi)氏曲霉同其他真菌相比高度耐熱，在10～52℃條件下均可生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度26～45℃，是引起果汁和經(jīng)熱處理的水果制品腐敗的主要耐熱菌之一。

國(guó)內(nèi)有人在研究煙曲霉及其同源菌屬產(chǎn)生FTA、FTB能力時(shí)發(fā)現(xiàn)，104株煙曲霉中，僅有3株能產(chǎn)生FTA，而且產(chǎn)毒量只有0.9～11.6mg／kg培養(yǎng)物；有98株能產(chǎn)生FTB，含量可達(dá)4.8～3052．0mg／kg培養(yǎng)物。從日本22個(gè)縣采集的1147份土壤樣品中，共有673份(占59％)分離出煙曲霉，其中稻田和菜地土樣中煙曲霉檢出率較高，分別為69％～100％和36％～100％，森林地帶為5%～74％，草地、牧場(chǎng)為5％～82％，果園為23％～100%。將其中90株煙曲霉進(jìn)行產(chǎn)毒培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，89株可產(chǎn)生FTB，只有1株產(chǎn)生FTA。

二、毒性與危害

煙曲霉震顫素對(duì)大鼠、小鼠、家兔、豬、羊等中樞神經(jīng)系統(tǒng)有較強(qiáng)毒性，可引起動(dòng)物的強(qiáng)烈痙攣乃至死亡。在我國(guó)曾發(fā)現(xiàn)與此菌有關(guān)的、有痙攣癥狀的雞煙曲霉中毒。

煙曲霉震顫素A對(duì)小白鼠的LD₅₀腹腔注射為5mg／kg體重，靜脈注射為18μg／kg體重。隨著劑量的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)震顫、陣發(fā)性驚厥、體位呈袋鼠樣、強(qiáng)直性肌肉痙攣乃至死亡，其間伴有眼球震顫和縮瞳，腦電圖無明顯改變，有些神經(jīng)性藥物如抗驚厥劑等可以減輕上述癥狀或延緩癥狀出現(xiàn)的時(shí)間。

震顫毒素被認(rèn)為與串珠霉癥、燕麥草蹣跚癥和伐木工人病等有關(guān)。燕麥草蹣跚癥是指放牧的馬、牛、羊和鹿等家畜大量攝取燕麥草之后出現(xiàn)劇烈的神經(jīng)系統(tǒng)紊亂癥狀，包括震顫、共濟(jì)失調(diào)、對(duì)外界刺激高度敏感、強(qiáng)直性痙攣等，輕者可恢復(fù)，重者可導(dǎo)致死亡。伐木工人病是大量攝入高濃度氣源性孢子后引起的人類過敏性肺炎，急性癥狀包括發(fā)燒、顫抖、咳嗽、呼吸困難，一般在接觸后4～8h發(fā)病，24h后恢復(fù)。反復(fù)接觸可導(dǎo)致慢性癥狀，如進(jìn)行性呼吸困難和肺纖維化。

三、煙曲霉震顫素的檢測(cè)

1、色譜條件

色譜工作站：BIO-RADMODEL 700色譜工作站，配備BIO-RADMODEL 1706型UV／VIS可調(diào)檢測(cè)器。

檢測(cè)波長(zhǎng)：UV225nm。

色譜柱： BIO-RADBIO-SILODS-5SC₁₈反相色譜柱(4mm×250mm)或BECKMANSpherisorb ODSC_l8反相色譜柱(4.6mmx 250mm)。

流動(dòng)相：流動(dòng)相為10%的甲醇-水和90％的甲醇-水。

樣品提取液：三氯甲烷。

2、樣品處理

三氯甲烷振蕩提取樣品1h后，取少量提取液過0.45gm濾膜后直接進(jìn)樣。

3、洗脫條件

0～1min，10％的甲醇-水100％從2.0mL／min梯度降至0.5mL／min；1～12min，10％的甲醇-水流動(dòng)相0.5mL／min；12～14min，10％的甲醇-水100％0.5mL／min梯度轉(zhuǎn)至90％的甲醇一水100％1.0mL／min；維持6min后，在2min內(nèi)流動(dòng)相由90％的甲醇-水100 %1．0mL／min梯度轉(zhuǎn)至10%的甲醇-水100％2.0mL／min，在此條件下再維持10min后進(jìn)下一樣品。

4、FTB標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定

將FTB用甲醇稀釋成不同濃度后進(jìn)樣，根據(jù)進(jìn)樣量和峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5、回收率測(cè)定

取粉碎的玉米樣品(每份5g)置三角瓶中，分別加入FTB標(biāo)準(zhǔn)品，使成100pg/g、500pg/g、1000pg/g、1000pg/g和20000pg/g等濃度，樣品與標(biāo)準(zhǔn)品混勻后在室溫條件下自然晾干24h，然后每瓶加入三氯甲烷50mL，振蕩提取1h，直接取少量提取液過0.45μm濾膜后進(jìn)樣20～50μL，在UV225nm處檢測(cè)。根據(jù)FTB標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的FTB含量。

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